可以的。
大客车在凌晨两点至五点之间是不允许在高速公路上行驶的,这是根据《道路旅客运输企业安全管理规范》四十五条规定。因为凌晨2点到5点是人体最疲惫的时候,这个时候继续行驶很容易引发交通事故,所以为了安全起见,这段时间必须停车休息。如果您的驾照还不到一年,或者公交车上没有超过三年的驾照,那么您也不能单独上高速。但是,如果您有其他驾照,那么在其他时间段是可以在高速公路上行驶的。
法律依据是《中华人民共和国道路交通安全法》第三十九条,公安机关交通管理部门可以根据道路和交通流量的具体情况,对机动车、非机动车、行人采取疏导、限制通行、禁止通行等措施。如果遇到大型群众性活动、大范围施工等情况,需要采取限制交通的措施,或者作出与公众的道路交通活动直接有关的决定,这些措施和决定都应当提前向社会公告。